Основан в конце XVI века монахами Саввино-Сторожевского монастыря (Звенигород)[7] в районе современной Сочинской улицы, позднее — Успенская слобода. Первые сведения относятся к 1598 году — в одной из царских грамот Царя Бориса Годунова есть запись об Уфимском Успенском монастыре.
Первоначально монастырь представлял собой небольшую крепость со рвом, валами и бревенчатым частоколом. В одну из осад Уфы, первым приняв нападение ордынцев, монастырь был разорён, а первый его игумен Авраамий, по преданию, пал, пронзённый стрелой, прямо в церкви.